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尼康的A1R MP 是一款拥有独到技术的双光子显微成像系统,不仅具备高分辨率检流计式扫描器(galvanometer scanner),而且还配备了高速共振式扫描器(resonant scanner)。扫描速率在512 X 512像素水平下高达到30帧/秒;在带状扫描模式下高可达420帧/秒。新型四通道NDD探测器(non-descanned detectors)具有更高的探测效率、更低的暗电流以及更宽的响应光谱,可以对谱线相近的荧光探针进行实时光谱拆分与识别,并大大提高荧光图像的对比度。此功能对于双光子显微镜非常重要,因为在双光子成像时一般只能使用单一的激发波长,往往不可避免地造成自发荧光以及发射光谱的重叠。

多光子显微镜

高达420帧/秒成像速率的共振扫描镜

尼康所特有的共振扫描技术,较之于非共振的普通扫描器,大幅提高了宽视场扫描速率,达到了点扫描成像的世界快速率-420帧/秒。利用多光子显微术的NDD探测器,可以对非常厚的标本进行深部快速成像。尼康的光学同步(optical pixel clock)技术充分保证了超高速图像的均匀性和稳定性。

*1 NDD(Non-Descanned Detector),与共聚焦技术不同,A1R MP不需要使用小孔滤波(descan)。使得NDD探测器可以安装在靠近物镜出光口的位置,从而可以接收到更多的被厚标本散射的信号光,大幅提高灵敏度。通过A1RMP的超高速共振扫描,利用红外飞秒脉冲激光激发活体组织血管中的血细胞,并以30帧/秒的速率,三通道同时拍摄三色荧光图像。

箭头标记的是对白细胞胞核运动的追踪。

三种荧光探针同时成像:细胞核(蓝),内皮细胞层(绿),血浆(红)。长波长超快激光与超高速扫描器的结合有效阡低光损伤的同时提供了高精度时间分辨率的多光子成像。图像分辨率:512X512像素,图像采集速率:30帧/秒,物镜:60X水镜。

多光子显微镜高灵敏度NDD深部成像

尼康新开发的多光子四通道NDD探测器能够有效地进行标本深部的显微成像。较普通探测器而言,NDD的感光元件面积更大,灵敏度更高,并安装于距离物镜后出光口(back aperture)近的地方. 该配置有效地提高了对散射荧光的探测效率,具有更高的信噪比(S/N),对诸如活体组织等较厚的标本的拍摄,具有比普通共聚焦显微镜更为清晰稳定的图像质量。

*对于标本深部成像来说,非常重要的一点就是要尽可能多地探测到散射荧光。而实际探测深度主要取决于探测器的灵敏度、受光面积以及安装位置。

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